DETERMINACIÓN ESPECTROFLUORIMÉTRICA DE QUININA EN AGUA
TÓNICA
PROCEDIMIENTO
Preparar disoluciones de 100, 200, 300, 400 y 500 ppb a
partir de una disolución de sulfato de quinina de 2.5 ppm y
enrasar a 25 ml con H2SO4 0.1 N.
Registrar los espectros de excitación y emisión de una de
las muestras y medir la intensidad de fluorescencia a 350 nm
de excitación y 450 nm de emisión de todas ellas para
construir la recta de calibrado.
Pasar el contenido de un agua tónica a un vaso de
precipitado y agitar vigorosamente a temperatura ambiente
durante 10 minutos. Tomar 1.0 ml y añadir la cantidad
necesaria de H2SO4 concentrado (36 N)
para que en un volumen final de 250 ml sea 0.1 N. Registrar
los espectros de excitación y emisión, comprobando que en
estas condiciones la fluorescencia del agua tónica es debida
únicamente a la quinina. Medir la fluorescencia a 350 nm de
excitación y 450 nm de emisión calculando la concentración
de quinina en el agua tónica a partir de la recta de
calibrado.
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MATERIALES |
PRODUCTOS |
|
-
Espectrofluorímetro
-
Matraces de 25 ml.
-
Pipetas graduadas.
-
Vaso precipitado.
-
Agitador magnético con núcleo. |
-
Agua tónica
- H2SO4
-
Bisulfato de quinina |
PRÁCTICA Nº 2
VALORACIÓN POTENCIOMÉTRICA DE UNA MEZCLA DE
YODURO Y CLORURO CON ION PLATA
PROCEDIMIENTO
1)
Conectar el potenciómetro a la red y colocarlo en
fase de calentamiento de acuerdo con las instrucciones.
2) Preparar e
instalar los electrodos de acuerdo con las instrucciones.
3)
Pipetear 10 ml. de disolución problema a valorar e
introducirlos en un vaso de precipitados de 500 ml.
diluyendo con agua hasta unos 300 ml.
4) Colocar en
el interior del vaso un núcleo agitador e instalar todo el
sistema de agitación.
5)
Llenar
la bureta con la disolución de AgNO3 0.1 N e
instalarla de forma que su pico toque la disolución a
valorar.
6)
Conectar el agitador a la red y mantener una agitación
suave pero persistente durante toda la valoración,
interrumpiéndola solamente para la lectura del potencial.
7)
Introducir los electrodos (Ag-calomelanos) en el vaso de
forma que no puedan ser rozados por el núcleo agitador.
8)
Colocar el mando en mV y leer el valor de mV en este
momento.
9)
Añadir, desde la bureta, sucesivas porciones conocidas de
AgNO3 0.1 N y tras un breve tiempo de
agitación leer lo que marca el aparato.
10)
Representar gráficamente sobre papel milimetrado:
a) Variación
del potencial (E) en función del volumen (V) de AgNO3
añadido.
b) Primera
derivada.
c) Segunda
derivada.
11) Deducir
de las gráficas el volumen de equivalencia y realizar
los cálculos oportunos para expresar la concentración de Cl
-
y I- de la mezcla.
|
MATERIALES |
PRODUCTOS |
|
‑ Potenciómetro
‑ Electrodo de
Ag.
‑ Electrodo de
calomelanos
‑ Vaso 500 ml.
‑ Bureta
‑ Agitador y
núcleo
‑ Pipeta
aforada de 10 ml.
‑ Frasco
lavador |
- Disolución
problema
- AgNO3
0.1 N |
PRÁCTICA Nº 3
DETERMINACIÓN CONJUNTA DE SULFAQUINOXALINA Y SULFAMETACINA
MEDIANTE ESPECTROFOTOMETRÍA
OBJETO
Demostrar el
uso de la espectrofotometría UV en el análisis de mezclas de
dos componentes, utilizando sus respectivos máximos de
absorción.
PROCEDIMIENTO
1.- Preparar
dos disoluciones madres de 100 mg/L una de Sulfaquinoxalina
(SQX, 50% etanol) y otra de Sulfametacina (SMT, 50% etanol),
disolviendo aproximadamente 10 mg de cada una de las drogas
en 100 mL de volumen final.
2.- A partir
de las disoluciones madres, por dilución, preparar en
matraces de 25 mL disoluciones de 4, 8, 12 y 16 mg/L de cada
una de las sulfamidas, añadiendo en todos los casos 5 mL de
disolución tampón NH4Cl/NH3 0.5 M de
pH = 10 y mantener el porcentaje de etanol constante,
teniendo en cuenta el contenido de etanol de la muestra más
concentrada.
3.- Preparar
un blanco en las mismas condiciones que el resto de las
muestras (% de etanol y tampón).
4.-
Registrar los espectros de absorción de cada una de las
disoluciones preparadas anteriormente frente al blanco y
en el rango de longitudes de onda comprendido entre 200 y
315 nm a una velocidad de barrido de 600 nm/min. nm.
5.- Una vez
obtenidos los espectros de absorción, buscar las dos
longitudes de onda de interés, para el establecimiento del
sistema de ecuaciones posterior (aquellas en que los
espectros de las dos sulfamidas presenten una absorbancia
elevada).
6.- Comprobar
que para las longitudes de onda seleccionadas y en el rango
de concentración estudiado la respuesta es de tipo lineal.
Si esto es así, obtener el valor medio de la absortividad de
cada una de las sulfamidas a las longitudes de onda
seleccionadas y comparar con los valores obtenidos a partir
de las ecuaciones de las rectas de calibrado.
7.- Registrar
el espectro de absorción de una mezcla problema de SQX y SMT
y calcular la concentración de cada una de las drogas usando
un sistema de ecuaciones.
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MATERIAL |
REACTIVOS |
|
-
10 matraces de 25 mL
-
2 pipetas de 2 mL
-
2 pipetas de 5 mL
-
1 frasco lavador
-
1 gotero de agua |
-
Sulfaquinoxalina
-
Sulfametacina
-
Tampón NH4Cl/NH3
de
pH = 10
-
Etanol. |
PRÁCTICA Nº 4
DETERMINACIÓN POTENCIOMÉTRICA DE FLUORUROS EN ENJUAGUES BUCALES
FUNDAMENTO
El electrodo selectivo de fluoruros se emplea ampliamente en la
determinación de fluoruros en una gran diversidad de materiales.
Un requisito necesario para su correcta utilización es la
necesaria utilización de una disolución amortiguadora de la
fuerza iónica total (TISAB) para ajustar todos los estándares y
las muestras problemas a prácticamente la misma fuerza iónica;
cuando este reactivo se usa, se mide más la concentración de
fluoruro que su actividad. El pH del amortiguador es alrededor
de 5, un nivel al cual el ión F es la especie predominante en
las especies que contienen flúor. El amortiguador también
contiene ácido ciclohexilamino-dinitrilotetraacético. El cual
forma quelatos estables con Fe (III) y Al (III), liberando el
ión fluoruro de sus complejos con estos cationes.
PROCEDIMIENTO
En matraces de plástico de 25.0 mL, preparar
disoluciones conteniendo concentraciones conocidas de F,
variables entre 1 y 5 mg/L, adicionando 10 mL de la disolución
TISAB y enrasando con agua desionizada. Se determina el
potencial de cada una de ellas y se construye la recta de
calibrado representado el valor del potencial frente al
logaritmo de la concentración de fluoruros.
A continuación y sobre un matraz de plástico de 25.0 mL
se añade 0,2 mL de la disolución problema (enjuague bucal), 10
mL de TISAB y enrasando con agua desionizada, agitar bien y
medir el potencial, calculando a continuación los mg/L de la
disolución comercial analizada.
MATERIAL Y REACTIVOS
- Potenciómetro
con electrodo selectivo de fluoruros y electrodo de referencia.
- Matraces
aforados de 25 mL de plástico.
- Solución
patrón de fluoruros de 25 mg/L, preparada a partir de NaF (PRECAUCION:
MUY TOXICO).
- Solución
TISAB
-
Pipetas de plástico.
PRÁCTICA Nº 5
SEPARACIÓN Y DETERMINACIÓN DE ANTIOXIDANTES MEDIANTE HPLC
FUNDAMENTO
La cromatografía líquida de alta resolución es empleada
ampliamente para la separación y determinación de numerosos
tipos de compuestos. El objeto de esta práctica es determinar
dos antioxidantes: Acido Gálico y acido gentílico presentes en
aceites vegetales.
 
Gentísico
Gálico
El estudio del contenido de
polifenoles presentes en aceites vegetales tiene bastante
interés por que son beneficiosos para la salud debido a sus
propiedades antioxidantes y porque contribuyen a la estabilidad
oxidativa de los aceites y están relacionados con sus
características organolépticas.
Para poder determinar la concentración de los antioxidantes
objeto de estudio en el aceite, es necesario extraerlos de dicha
matriz, para ello utilizamos una extracción en fase sólida (SPE).
Si elegimos adecuadamente las condiciones de trabajo, mediante
este proceso los analitos de interés quedan retenidos en la fase
sólida mientras que gran parte del resto de componentes del
aceite salen de la misma.
La modalidad cromatográfica utilizada en esta práctica es la
cromatografía líquida de partición con fases ligadas y en
fase inversa, utilizando un detector de diodos en fila en la
zona del ultravioleta.
Las condiciones cromatográficas de trabajo son las siguientes:
FASE MÓVIL:
Acetonitrilo:
Ácido acético 0.1%
(10:90)
FLUJO: 1 mL/min.
LONGITUD DE ONDA: 240, 275 y 330 nm
COLUMNA: C18
, 3 µm de tamaño de partícula y de 15 cm de longitud.
PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
Patrones
En matraces de
10 mL se preparan disoluciones que contenga 2.5, 5, 7.5 y 10
mg/L en metanol/agua (20:80) de cada uno de los antioxidantes
estudiados a partir de disoluciones concentradas de 100 mg/L.
Aceite
Disolver 6 g de
aceite en 5 mL de diclorometano y pasarlos a través de un
cartucho de extracción en fase sólida. A continuación lavar el
cartucho con 2 porciones de 10 mL de diclorometano con el fin de
eliminar posibles restos no polares del aceite que hubiesen
quedado retenidos en el cartucho. Por último eluir los analitos
pasando a través del cartucho 5 mL de metanol/agua (20:80),
constituyendo dicho extracto la muestra que posteriormente vamos
a introducir en el sistema cromatográfico.
ACONDICIONAMIENTO DEL CARTUCHO
Colocar el
cartucho en una jeringa y pasar en primer lugar 5 mL de
diclorometano y después 5 mL de metanol:agua (20:80).
PROCEDIMIENTO
Teniendo en
cuenta las condiciones cromatográficas anteriormente descritas
se procede a la obtención de los cromatogramas correspondientes
a los patrones y el extracto obtenido de la muestra de
aceite. La identificación de los picos se realiza mediante
comparación de los tiempos de retención y espectros de absorción
de las muestras de aceite y patrones. La cuantificación de los
analitos se realiza comparando las áreas de los picos obtenidos
en la muestra de aceite y las de los dos patrones.
RESULTADOS
1.- A partir del cromatograma correspondiente a uno de los
patrones, calcular:
- Eficiencia
para cada compuesto (N).
- Factor de
capacidad (K’).
- Factor de
separación.
- Resolución
cromatográfica entre los dos picos obtenidos.
2.- Calcular la concentración de ácido gálico y gentísico en
mg/L en el aceite analizado.
|
MATERIAL |
PRODUCTOS |
|
‑
Cromatógrafo
-
Matraces de 10 mL
-
Pipetas
-
Jeringuillas
-
Cartucho Sep-pack |
-
Disolución de Ácido Galico (200 mg/L)
-Disolución de Ácido gentísico (200 mg/L)
- Muestra
de aceite |
Tiempo de retención (tR)
El factor de capacidad (K’)
:
Factor de selectividad
(a
)
Eficacia
de la columna.(N)
w : anchura de la base del
triángulo construido por el pico.
w1/2:
anchura de la media altura del pico.
Resolución (Rs)
w1
y
w2
son las anchuras en las bases de los picos 1 y 2
respectivamente.
tR1 y tR2
son los tiempos de retención de los picos de soluto sucesivos.
PRÁCTICA Nº 6
DETERMINACION
EXTRACTOESPECTROFOTOMÉTRICA DE AMARANTO Y ERITROSINA
OBJETO
El objeto de esta práctica es la determinación simultánea de
dos colorantes: Amaranto y Eritrosina en una bebida. En
primer lugar se realiza una separación previa de estos
compuestos mediante extracción líquido-liquido utilizando
metil-isobutilcetona para extraer Eritrosina permaneciendo
el Amaranto en fase acuosa. Posteriormente se determina cada
colorante mediante medidas espectrofotométricas en el máximo
de absorción.
RECTAS DE CALIBRADO
En matraces de 25 mL se adicionan volúmenes variables de la
disolución patrón de Eritrosina y Amaranto de manera que la
concentración de cada uno de ellos sea 2, 4, 6, 8 y 10 mg/L,
etanol hasta que el contenido total sea de 25% del
volumen final, 2.5 mL de tampón HAc/Ac-
de pH = 4.8 y agua destilada hasta enrase.
Transferir 10 mL de cada una
de las disoluciones a embudos de decantación de 100 mL y
adicionar sobre estos 10 mL de metil-isobutilcetona. Agitar
los embudos durante 2 minutos depositar los embudos en sus
soportes, separar las fases y centrifugar la fase orgánica.
Realizar los espectros de
absorción de cada una de las fases para uno de los
calibrados y seleccionar las longitudes de onda
correspondientes a los máximos de absorción. Para las demás
disoluciones medir la absorbencia de la fase acuosa y
orgánica a las longitudes de onda seleccionadas.
Se calcula el contenido de
cada compuesto en mg/L en la muestra problema mediante las
rectas de calibrado.
PRÁCTICA Nº 7
DETERMINACIÓN DE Cu y Zn EN VINAGRE MEDIANTE ABSORCIÓN ATÓMICA
PRINCIPIO
Determinación
directa por espectrofotometría de absorción atómica
PROCEDIMIENTO
Preparación
de las muestras:
- No se necesita preparación especial. En caso de elevada
concentración realizar una o varias diluciones hasta quedar
dentro del rango de medida.
Determinación:
Diluir partes alicotas de las disoluciones de Cu o Zn con ácido
acético al 5% para obtener soluciones de Cu de 0.25; 0.5;
2.0 y 5.0 mg/L y de Zn de 0.25; 0.5; 1.0 y 2.0 mg/L.
Aspirar las
soluciones patrón y construir las correspondientes rectas de
calibrado. Las longitudes de onda de medida serán 213,8 nm
para el Zn y 324,8 nm para el Cu.
INTERPRETACIÓN DE
LOS RESULTADOS
Partiendo
de los valores de absorbancia obtenidos, hallar las
concentraciones de Zn y Cu en las muestras de los distintos
vinagres.
|
MATERIAL Y APARATOS |
REACTIVOS |
|
-
Espectrofotómetro de absorción atómica, con llama
aire-acetileno.
-
Lámpara de cátodo hueco de Zn.
-
Lámpara de cátodo hueco de Cu. |
-
Acido acético glacial.
-
Cinc nitrato R.A.
-
Cobre nitrato R.A.
-
Disolución 250 mg/L de Cu.
-
Disolución 250 mg/L de Zn. |
PRÁCTICA Nº 8
DETERMINACIÓN DE SODIO Y POTASIO EN AGUAS NATURALES MEDIANTE
FOTOMETRÍA DE EMISIÓN EN LLAMA
PRINCIPIO
Se pueden determinar cantidades traza de sodio y potasio
por fotometría de emisión de llama a las longitudes de onda de
589.0 y 766.5 nm, respectivamente. Se pulveriza la muestra en
una llama aire-acetileno y la excitación se realiza en
condiciones controladas y reproducibles.
PROCEDIMIENTO
1.-
Preparar una curva de calibración en matraces de 25 mL de 1, 3,
7 y 19 mg/L de Na y K respectivamente.
2.-
Medir la intensidad de radiación emitida por los patrones de
sodio y las muestras a 589.0 nm.
3.-
Por referencia directa a la curva de calibración calcular la
concentración de sodio expresada en mg/L de las muestras.
4.-
Para la determinación de potasio, proceder igual que en la
determinación de sodio, midiendo la emisión a 766.5 nm.
|
MATERIALES-EQUIPO |
PRODUCTOS |
|
-
Espectrofotómetro de
absorción-emisión atómica con llama aire-acetileno
Varian 300. |
-
Solución madre de 500 mg/L de sodio
y 500 mg/L de potasio.
- Muestras de aguas |
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